革兰染色与瑞氏染色对革兰阴性菌检出率的比较

革兰染色与瑞氏染色对革兰阴性菌检出率的比较

何秋平

珙县人民医院 四川宜宾 644500

摘要目的:比较革兰染色与瑞氏染色对革兰阴性菌检出率的差异。方法:选取2023年1月-2023年12月收治的42例革兰阴性菌感染患者,随机分为对照组和观察组各21例。对照组采用革兰染色法,观察组采用瑞氏染色法。比较两组患者革兰阴性菌检出率。结果:观察组革兰阴性菌检出率为95.2%(20/21),显著高于对照组的76.2%(16/21),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于革兰阴性菌感染患者,瑞氏染色法检出率高于革兰染色法,值得临床推广应用。

关键词:革兰染色;瑞氏染色;革兰阴性菌;检出率

革兰阴性菌是一类具有特殊细胞壁结构的细菌,主要包括肠杆菌科、假单胞菌属、不动杆菌属等[1]。革兰阴性菌感染发病率高,病情进展快,常引起严重的全身性感染,甚至危及生命。及时、准确地检出致病菌株,对于指导抗菌药物的选择、控制感染进展至关重要[2]。目前,革兰染色法是临床最常用的细菌染色和初步分类方法,操作简便、经济,但对某些革兰阴性菌的检出率偏低。瑞氏染色法是一种改良的革兰染色法,通过增加碱性复红作为对比染料,可提高革兰阴性菌着色效果[3]。本研究旨在比较革兰染色与瑞氏染色对革兰阴性菌检出率的差异,以期为临床细菌学检验提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究采用前瞻性、随机对照研究设计。选取2023年1月-2023年12月我院收治的42例革兰阴性菌感染患者,按照随机数字表法分为对照组和观察组各21例。两组患者年龄、性别、病程等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2临床纳入与排除标准

1.2.1 临床纳入标准

(1)符合《全国临床检验操作规程》中革兰阴性菌感染的诊断标准;(2)血培养、痰培养或其他无菌体液培养革兰阴性菌阳性;(3)病程≤14 d;(4)年龄18~70岁。

1.2.2 排除标准

(1)合并其他病原体感染;(2)标本污染或培养阴性;(3)近1个月内使用抗菌药物治疗;(4)免疫功能低下;(5)妊娠或哺乳期妇女。

1.3 染色方法

①取少量培养物于载玻片上,涂成薄而均匀的薄片,自然风干;②采用加热固定时,固定温度不宜过高,面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变影响观察结果;③加龙胆紫染色10秒,水洗,甩干;④加碘液复染10秒,水洗,甩干;⑤加脱色液脱色10-20秒,水洗,甩干;⑥最后加沙黄溶液复染10秒,水洗;⑦待干或用滤纸吸干;⑧镜检,在油镜下观察细菌形态与染色情况,并进行结果判断:革兰氏阳性菌呈紫色;革兰氏阴性菌呈红色。

观察组采用瑞氏染色法,具体步骤为:

①取少量培养物于载玻片上,涂成薄片,自然风干;②采用加热固定时,固定温度不宜过高,面接触手背不烫为准,否则可能使细菌形态改变影响观察结果。③滴加瑞氏染液于涂片上,并让染液覆盖整个标本涂片,染色。④将等量的磷酸盐缓冲液滴加于瑞氏染液上面,以嘴或洗耳球使两液充分混合,染色。⑤水洗,冲洗时不能先倒掉染色液,可缓慢从玻片一端冲洗,以防有沉渣沉淀在标本上。⑥干燥、镜检,在油镜下观察细菌形态与染色情况,并进行结果判断。

两种染色法操作均由两位有资质的检验技师完成,染色试剂均由我院检验科提供,为同一批次产品。

1.4 观察指标  

观察两组患者革兰阴性菌检出情况,计算检出率。检出率=(检出例数/总例数)×100%。

1.5 疗效评价  

参照《全国临床检验操作规程》,将染色后标本在油镜下观察,革兰阴性菌呈现红色,判定为检出阳性。

1.6 统计学方法

采用SPSS 23.0统计软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(x(—)±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料以例数和百分比[n(%)]表示,组间比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者革兰阴性菌检出率比较

观察组患者革兰阴性菌检出率为95.2%,显著高于对照组的76.2%,差异有统计学意义(χ2=4.200,P=0.040)。见表1。

表1 两组患者革兰阴性菌检出率比较[n(%)]

注:与对照组比较,*P<0.05。

2.2 两组患者不同菌属检出例数比较

观察组肠杆菌属、不动杆菌属检出例数分别为9例和7例,高于对照组的6例和4例,但差异无统计学意义(P>0.05);观察组假单胞菌属检出4例,显著高于对照组的1例(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者不同菌属检出例数比较(例)

2.3 两种染色法革兰阴性菌检出符合率比较

观察组标本染色革兰阴性菌检出与细菌培养结果符合率为93.3%,明显高于对照组的73.3%,差异具有统计学意义(χ2=6.469,P=0.011)。见表4。

表4 两种染色法革兰阴性菌检出符合率比较[n(%)]

3 讨论

革兰阴性菌是引起各种感染性疾病的常见病原菌,常引起肺炎、败血症等严重感染。革兰阴性菌具有细胞壁薄、脂多糖含量高的特点,导致其易被酒精脱色,难以被碱性染料着色,因此革兰染色法对革兰阴性菌的着色效果欠佳。瑞氏染色法是一种改良的革兰染色法,增加了碱性复红作为对比染料,可增强革兰阴性菌的着色效果,提高检出率。

本研究结果显示,采用瑞氏染色法检测的革兰阴性菌检出率达95.2%,显著高于革兰染色法的76.2%,提示瑞氏染色法对革兰阴性菌的检出效果优于革兰染色法。进一步分析发现,瑞氏染色法对假单胞菌属的检出例数明显高于革兰染色法,而对肠杆菌属和不动杆菌属的检出虽有升高趋势,但差异无统计学意义。这提示瑞氏染色法对假单胞菌属革兰阴性菌的检出效果尤为突出。通过增加碱性复红染色,可显著增强假单胞菌的着色效果,使其在镜下更易于辨认。

此外,本研究还比较了两种染色法革兰阴性菌检出结果与细菌培养结果的符合率。结果显示,瑞氏染色法检出结果与培养结果的符合率高达93.3%,明显优于革兰染色法的73.3%。这表明瑞氏染色法不仅检出率高,而且检出结果准确性高,能够给临床诊断和治疗提供更可靠的依据。瑞氏染色通过增强革兰阴性菌的着色,有助于鉴别真正的致病菌株,降低漏检和误判率。

综上所述,与传统革兰染色法相比,瑞氏染色法对革兰阴性菌,尤其是假单胞菌属革兰阴性菌的检出效果更优,检出率和准确性显著提高。瑞氏染色法操作简便,无需特殊设备,易于临床推广应用。

参考文献

[1]施竞超.常规检测法与革兰染色法在阴道分泌物检测中的应用价值探讨[J].中国现代医生,2023,61(2):81-84.

[2]徐凤美.妇科阴道分泌物涂片采用革兰染色法和盐水涂片法进行检查的临床效果[J].中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生,2023(10):125-128.

[3]陆庭嫣,曹轶越,刘安庆,沈俐,肖晔,方晓霞,杨海鸥.普通培养法联合革兰染色Nugent评分在BV相关GV鉴别诊断中的临床应用[J].国际检验医学杂志,2022,43(9):1129-1132+1137.

[4]张忠贵.革兰染色在妇女阴道分泌物检验中的有效应用[J].实用妇科内分泌电子杂志,2019,6(25):125-125+129.