HIV抗体免疫检测技术科普

HIV抗体免疫检测技术科普

宋国军

泾阳县中医医院 陕西 咸阳泾阳 713700

HIV是人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus）的简称，HIV感染可引起获得性免疫缺陷综合征，也就是艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）。HIV可通过性接触传播、血液传播、母婴传播，会破坏CD4+T淋巴细胞，导致机体免疫功能受损或缺陷，导致各种机会性感染以及恶性肿瘤，严重威胁患者的生命健康安全。感染HIV的人是艾滋病的传染源，为了防控艾滋病，需要及时筛查HIV感染患者，从而尽早干预。HIV抗体检测是目前临床筛查HIV感染者的重要方法，其中HIV-1/HIV-2抗体检测是目前临床常用的筛查方法，通常是采取各种HIV抗体免疫检测技术进行诊断，对于初筛阳性的患者，还需要经疾控中心的蛋白印记检查最终明确诊断。文章主要就HIV抗体免疫检测技术展开科普。

1.什么是HIV？

HIV是指人免疫缺陷病毒，HIV感染是引起艾滋病的主要原因。艾滋病在我国属于乙类传染病，其主要是由于人体通过各种途径感染HIV病毒，HIV病毒破坏人体免疫功能，最终导致细胞免疫功能缺陷，从而导致各种感染性疾病以及恶性肿瘤的发生。HIV的传播途径主要包括：①性接触：性接触传播通常是由于与HIV感染者进行无保护性行为发生HIV感染。由于HIV病毒广泛存在于HIV感染者的体液中，尤其是精液、阴道分泌物，在阴道性交、肛交、口交时，由于器官摩擦容易发生黏膜损伤，HIV病毒可通过破损黏膜进入未感染者的身体中，引起HIV感染的传播。男男性行为以及多性伴侣人群是HIV感染的高发人群。②血液传播：静脉吸毒人群共用针头容易引起HIV感染；医护人员偶然被HIV病毒污染的锐器刺破皮肤可导致职业暴露；不规范的侵入性操作例如纹身也可导致HIV感染。③母婴传播：胎儿容易发生宫内感染，或者是分娩以及哺乳期出现HIV感染。

近些年来随着社会环境变化，我国艾滋病发生率呈逐年升高趋势。据第九届全国艾滋病学术大会指出：截至2023年年底，全国报告存活的艾滋病病毒感染者和艾滋病患者共有129万名，而2023年我国新增艾滋病患者11.05万人。艾滋病作为一种传染病，对公共健康安全造成较大的威胁。目前艾滋病虽然无法治愈，但是通过早期使用高效联合抗反转录病毒治疗，可以抑制HIV病毒复制，从而稳定患者的病情。因此HIV感染者的筛查工作成为公共卫生管理的重要内容，早期筛查HIV感染者，尽早进行干预，有助于改善患者的预后情况。

2.HIV抗体免疫检测技术

HIV具有较强的传染性，因此HIV感染不仅仅会威胁身体健康，还会威胁社会公共安全。若HIV感染未经诊断和治疗，感染者可能会将HIV传染给他人，给家庭与社会带来较大的负担。加强对HIV感染的早期筛查，对于预防艾滋病发生、维护公共卫生安全具有重要的现实意义。HIV抗体免疫检测技术是目前HIV感染筛查的常用手段，对于HIV感染有着较高的灵敏度与特异性，因此需要深入了解相关技术，提高人民群众对临床检测的配合度。

2.1酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法最早出现于20世纪80年代，在临床中的应用时间长，对于HIV-1/HIV-2抗体有着较高的灵敏度与特异性，窗口期较窄，可以尽早发现HIV感染，从而采取有效的干预措施。该方法主要是利用酶与抗体或抗原的特异性结合，通过酶的活性来定量或定性分析目标物质的存在。酶联免疫吸附法在临床中的应用范围广，可以处理大数据样本，且操作相对简单，可应用于区域流行病学调查。酶联免疫吸附法在HIV感染中的诊断准确率较高，由于酶标记的放大效应以及检测技术的不断进步，可以减少非特异性结合的发生，即使是感染早期，HIV抗体浓度较低，也有较高的检出率，从而减少误诊的情况发生。酶联免疫吸附法可以进行定量分析，明确HIV抗体浓度，从而提高筛查结果的准确性。酶联免疫吸附法在临床筛查中的应用，具有操作简单、检测速度快、经济实惠的优势，适用于HIV感染的初筛。酶联免疫吸附法在实际应用中，通常是采用试剂盒进行操作，只需要严格按照试剂盒说明书进行操作，即可减少人为因素的干扰，通过标准化的操作步骤，严格控制样本质量，减少样本污染，从而提高诊断准确联系。对于酶联免疫吸附法检测阳性的患者，可以进行蛋白印迹法进行进一步检查，从而明确诊断。

2.2快速检测技术

HIV抗体快速检测技术是目前临床筛查HIV感染的常用方法，主要包括免疫斑点试验、免疫层析试验以及凝集试验。此类方法可以采用血浆、血清、唾液、尿液等样本进行检测。临床中应用最广泛的为血浆、血清检测。唾液检测与尿液检测通常适用于采血困难或不具备采血条件的环境，多应用于性工作者、静脉吸毒人群的临时检测。

①免疫斑点试验

免疫斑点试验主要是使用特殊的膜来包裹HIV抗原，常见的有硝酸纤维膜。若血液样本中存在HIV抗体，被膜包裹的抗原在与HIV抗体结合之后形成免疫复合物，该复合物在与酶标记的抗人免疫球蛋白结合之后，加入底物时可以让膜着色，形成肉眼可见的斑点。这种试验的操作相对复杂，价格也相对更高。

②免疫层析试验

免疫层析试验主要是使用硝酸纤维膜包裹被特殊材料标记的HIV抗原。若血液样本中存在HIV抗体，那么特殊材料标记的抗原与抗体相结合形成免疫复合物，该复合物由于层析作用向前一同，与重组或多肽HIV抗原复合物结合而显色。如果检测区与对照区都有一条红线出现，则可判断为HIV抗体阳性。若检测区无红线出现，而对照区出现一条红线，则可判断为HIV抗体阴性。如果两个区域都无红线出现，则判断检测无效。该方法具有操作简单、检测结果容易判断的优势。该方法的耗时短，可采用血浆、血清以及尿液进行检测，艾滋病患者由于HIV抗体较多，检测两分钟后即可获得阳性结果；而急性期患者由于HIV抗体需要在感染数周后才出现，可能出现假阴性结果。因此通常是作为辅助诊断使用。

③凝集试验

该方法使用吸附HIV抗原来检测血样中的HIV抗体，比较常见的有乳胶颗粒、明胶颗粒等。例如明胶颗粒实验主要是将重组HIV-1抗原与HIV-2抗原包裹在明胶粒子中，如果血样中存在HIV抗体，那么就会与明胶粒子中的抗原产生凝聚反应，对于HIV抗体具有较高的灵敏性与特异性，无需特殊的仪器设备，并且实验方法简单。但是该方法的反应时间较长，因此不适用于急诊患者中使用。

2.3化学发光免疫法

化学发光免疫法是目前HIV抗体筛查中的常用方法之一，其主要是利用样本与特定试剂产生化学发光信号，利用仪器设备对信号强度进行检测与分析。与常规检测技术相比，其具有更多的优势，可以早期发现HIV感染，这主要是由于HIV感染初期，HIV抗原出现时间要比HIV抗体更早，因此检测准确性更高，该方法的灵敏性要高于酶联免疫吸附法，具有较高的筛查价值。化学发光免疫法的自动化水平高，可在临床批量样本检测中应用。因此在HIV抗体大样本筛查中，可先进行化学发光免疫法检测，对于阳性患者进行进一步的复查，从而尽早发现HIV感染者。

2.4时光分辨荧光免疫分析技术

时光分辨荧光免疫分析技术（TRFIA法）主要是采用三价稀土金属铕作为标记物，抗原抗体反应后利用仪器设备检测荧光强度，从而对HIV抗体进行定量分析。与酶联免疫法相比，该方法对于低浓度HIV抗体具有较高的检出率，并且可以进行量化分析，提高临床诊断的准确率。由于HIV感染的窗口期较长，该方法可以筛查HIV感染早期患者，缩短窗口期，能够帮助患者早期诊断和治疗，防控艾滋病的发生。该技术研发的试剂盒在HIV抗体中的灵敏性与特异性均在98%以上。

2.5蛋白印迹法

目前临床对于艾滋病主要是采取筛查试验与确证试验两步。先通过上述方法进行初步筛查和复检，对于复检阳性的患者，可经过蛋白印迹法进行确诊。该方法主要是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术，可对蛋白进行定性与半定量分析，结合化学发光法，可以比较同种蛋白表达的差异。该方法可分为抗原分离、抗原印迹和抗原检定三个步骤，具有易于操作、抗干扰性好、孵育与洗涤的时间短，在艾滋病临床诊断中属于金标准。目前艾滋病临床诊断中主要是以疾控中心的蛋白印迹法作为最终诊断结果，对于该方法诊断阳性的患者，可以及时进行高效抗反转录病毒治疗，从而稳定病情，改善患者的预后情况。总体来说，对于存在HIV感染高危因素的人群，需要积极配合临床筛查，尽早发现、尽早治疗。

3.结束语

HIV感染是引起艾滋病的主要原因，且感染HIV的患者都是该病的传染源。近些年来随着我国艾滋病发生率升高，HIV感染者筛查成为临床防控工作的重要内容。HIV抗体免疫监测技术在筛查HIV感染者中起到了重要作用，因此需要深入了解各种技术的原理以及优缺点，从而合理选择筛查方法，提高HIV感染者的检出率，尽早发现、尽早干预，降低我国艾滋病的发生率。